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高效液相色谱仪（HPLC）
High performance liquid chromatography
高效液相色谱仪（HPLC）
| 设备名称 | 高效液相色谱仪（HPLC / UPLC） |
| 原理 | 高压泵输送流动相，样品在色谱柱上按分配/吸附差异分离 |
| 分离模式 | 反相（C18 柱，最常用）、正相、离子交换、尺寸排阻 |
| 常用检测器 | 紫外-可见检测器（DAD/PDA）、荧光检测器（FLD）、质谱（MS） |
| 适用对象 | 难挥发、热不稳定、极性较大的化合物 |
| 典型应用 | 甲醛（衍生化后）、致敏染料、致癌染料、APEO、部分农药 |
HPLC 用液体作为流动相分离化合物，适合难挥发、热不稳定的物质，是甲醛、致敏分散染料、致癌染料、部分农药残留的常用检测手段。
工作原理与选型
与气相色谱不同，HPLC 的流动相是液体，样品不需要汽化，因此能分析热不稳定、难挥发、极性强的化合物——这正好覆盖了染料、表面活性剂与多数生态限制物质的特性。
反相色谱（C18 柱 + 水/乙腈或水/甲醇流动相）占日常应用的绝大多数。检测器选择：有紫外吸收的用 DAD（如甲醛衍生化产物、多数染料）；有荧光或可衍生出荧光的用 FLD（灵敏度更高）；需要高灵敏度与确证能力的用 MS/MS。
使用与维护要点
流动相必须过滤（0.45 μm 或 0.22 μm）并脱气，颗粒与气泡会堵塞柱与管路、造成基线噪声。
反相柱使用后需用高比例有机相冲洗保存，长期用纯水相会损坏固定相。
含缓冲盐的流动相不可在泵内长时间停留，用后需用纯水充分冲洗系统（盐结晶会磨损泵与堵塞管路）。
色谱柱有柱效寿命，压力升高与峰形拖尾是柱老化的信号。
- 配制并过滤、脱气流动相
- 平衡色谱柱至基线稳定
- 设定波长程序（DAD）或质谱参数
- 用标准曲线定量，带空白、平行样与加标回收
常见问题与判定
HPLC 对同分异构体的分离能力有限，染料类检测（尤其致敏分散染料）往往需要依靠 LC-MS/MS 的质量信息辅助定性。
甲醛检测常用乙酰丙酮衍生化后用 HPLC 或紫外可见分光光度法测定（GB/T 2912 系列），衍生化条件与时间需严格控制。
相关词条
- 甲醛含量（formaldehyde）
- 致敏性分散染料（qc-allergenic-dyes）
- 致癌染料（qc-carcinogenic-dyes）
- 气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）（qc-gc-ms）